gRNA constructs

老挝赌场报道CRISPR/Cas9基因组编辑-gRNA质粒构建_老挝赌场官网资讯【澳博18AoBo.com】

CRISPR/Cas9是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。只需要在细胞中导入合成的sgRNA或sgRNA表示载体,即可配合同时表示的Cas9核酸酶,对任何物种的基因组进行高效率的定向编辑。相比于ZFN系统和TALEN系统,CRISPR/Cas9是当前操作超便捷,耗时足够短且效率足够高的基因组定点编辑技术。

金斯瑞为您提供的CRISPR原料源于张峰实验室研发,所提供的CRISPR老挝赌场线上和老挝赌场在线得到美国 Broad 研究所授权许可,包括:

  • 已设计好的sgRNA序列,可高效特异地靶向人或小鼠基因组的任何基因
  • 依据质粒转染实验所需要的抗生素筛选方法选择适合的all-in-one gRNA-Cas9载体或单一载体(非病毒质粒转染)
  • 改进的慢病毒载体或AAV载体
  • 基于CRISPR激活内源基因转录的SAM质粒

质粒构建选择

  • WT SpCas9- SpCas9是常用的Cas9核酸酶,来自于酿脓链球菌,编辑高效但存在脱靶效应;
  • SAM- 没有切割活性的Cas9与激活元件协同起作用的复合物,可激活内源性基因的转录;
  • Nickase- SpCas9 D10A突变株,相对于WT SpCas9的双链断裂,nickase发生DNA单链断裂,由一对nickase相同作用,才可完成双链断裂;两个gRNAs同时恰巧靠近脱靶位点的可能性极低,因此提高了gRNA识别的特异性,大大降低了脱靶率;
  • SaCas9- 来自金黄色葡萄球菌的Cas9核酸酶(SaCas9),比SpCas9小25%,使得AAV Cas9包装成为可能。在切割效率和DNA靶向精确度方面,SaCas9 与SpCas9相当。

老挝赌场在线优势

  • 通过验证的质粒结构和优惠的价钱:价钱实惠,老挝赌场在线涵盖gRNA设计,合成并克隆至任一载体,欢迎询价订购;
  • 即时准备交付:超越20,000个质粒可即时交付(注:需要6个工作日来完成QC检测);
  • gRNA设计更便捷:gRNA序列由张锋实验室设计,涵盖人和小鼠基因组一切基因。由张峰实验室开拓的设计发现,现可设计多达12个物种的gRNA。老挝赌场国际gRNA设计:
    • Genome-wide gRNA database: 查找野生型SpCas9 和 SAM的人或小鼠sgRNA序列;
    • gRNA design tool: 查找多物种中用于WT SpCas9或nickase的gRNA序列;
    • Online request form: 专家团队设计特别的gRNA应用于任何物种的编码或非编码基因.
  • 帝宝国际 开户 all-in-one载体,或克隆至任意载体:选择金斯瑞帝宝国际 开户载体,包括all-in-one载体等。如果需要克隆到其它载体,请提前告知,我们将帝宝国际 开户进行亚克隆,您将收到适用于表示的CRISPR/Cas9载体。
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应该选择哪种gRNA

随着CRISPR/Cas9基因组编辑技术的继续火热,对gRNA质粒载体的数量也相应增加。不同CRISPR载体具有不同的优点,取决于您的实验系统和下游的应用。

如何设计gRNA序列? 设计gRNA序列包括四个步骤:(1)确定靶基因的地位;(2)寻找Cas9靶向的适当序列;(3)检测脱靶效应;(4)选择能恰当结合目的地位的gRNA。金斯瑞gRNA数据库和在线设计工具能够提供脱靶评分和染色体地位信息,帮您在选择gRNA序列时,幸免许多臆测性的工作。了解欢乐时时彩送18gRNA序列设计实例信息,请点击此处

选择all-in-one载体还是双载体系统?大多数情况下,无论使用非病毒或慢病毒转染方法,优先选用all-in-one载体系统。优点是只需要转染一次,gRNA和Cas9表示为1:1比例。载体上通常包含选择标志,如抗生素抗性或荧光蛋白标志,能够更方便地选择阳性克隆。Cas9和gRNA在不同载体上分开表示的双载体系统,更适用于靶向多个gRNA。这种情况下,Cas9能够先在细胞系中稳定表示,然后转染多个不同的gRNA载体,形成一个细胞库或gRNA库。

什么情况下需要慢病毒载体或腺相关病毒载体? 基因组编辑的质粒构建方式选择,取决于细胞类型和应用。对于许多易于转染的细胞系,用于一般筛选目的,非病毒载体能够很好的起作用。慢病毒转染通常用于原代细胞培育和难转染的细胞中,具有较低的瞬时转染效率。使用all-in-one载体或双载体系统,取决于是否应用于树立单靶点敲除细胞系或细胞库。腺相关病毒(AAV)载体具有低的免疫原性,更适用于体内基因delivery. 由于AAV载体的装载容量通常比其它载体小,约为4.5 kb,将SpCas9重组进这种载体有肯定的困苦。SaCas9比SpCas9更小,更适用于AAV包装。

CRISPR相关资源

    CRISPR™老挝赌场线上和老挝赌场在线执照许可
  • 金斯瑞为客户提供的GenCRISPR™老挝赌场线上和老挝赌场在线得到美国 Broad 研究所,哈佛大学和麻省理工学院授权许可。GenCRISPR™老挝赌场线上和老挝赌场在线受到US 8,697,359, US 8,771,945, US 8,795,965, US 8,865,406, US 8,871,445, US 8,889,356, US 8,889,418, US 8,895,308, US 8,906,616及多国同等专利保护。
  • GenCRISPR™老挝赌场线上和该老挝赌场在线中生成的试剂只能作为工具用于科学研发目的,不得用于以下用途:
    (1)任何人体或临床的使用;(2)修改任何人类生殖体系,包括改变人类胚胎或人的生殖细胞的DNA;(3)任何作为兽药或在牲畜体内的使用;(4)制作、批发、进口、出口、运输、销售、许诺销售、市场营销及推广,或其余开拓,对人类或动物的测验老挝赌场在线,治疗或诊断。
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